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A375/DDP細胞株的篩選我們要注意加藥時間

點擊次數:817 發布時間:2020-12-25
  A375/DDP細胞株是用單細胞分離培養或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。原代培養物經*傳代成功后即為細胞系(cell line), 由原先存在于原代培養物中的細胞世系所組成。
  如果不能繼續傳代,或傳代次數有限, 可稱為有限細胞系(finite cell line), 如可以連續培養, 則稱為連續細胞系(continuous cell line), 培養50代以上并無限培養下去。
  所以細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得的具有特殊性質或標志的培養細胞。從培養代數來講,可培養到40-50代。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。對于人類腫瘤細胞,在體外培養半年以上,生長穩定,并連續傳代的即可稱為連續性株或系。
  A375/DDP細胞株的篩選我們要注意加藥時間以及維持濃度:
  1、由于基因轉染到細胞內之后要一段時間才能表達出蛋白質。所以A375/DDP細胞株篩選時不能太早;但是也不能太晚,因為轉染了外源基因的細胞代謝負荷較大,增值較慢,時間長了就會被沒有外源基因轉入的細胞所淹沒,終導致篩選不出陽性克隆,一般要在轉染24小時之后才開始加篩選。隨著細胞的代謝,濃度和活性都會下降,所以每3-5天都要更換一次篩選液。
  2、加抗生素的時機,主要是考慮插入到細胞基因組的抗性基因是否已經得到表達。一般是轉染48小時后加入抗生素。挑出單克隆后就可以用維持濃度,一般是穩定A375/DDP細胞株篩選濃度的1/2。
  關于維持濃度,有人說細胞會出現對抗生素的抗性,應不斷提高其濃度。而且如果要挑選幾個陽性克隆中較高表達的克隆的話,可以調整抗生素的濃度。當然,抗性基因高表達,目的基因不一定就跟著高表達。
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