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淺析胎牛血清透析操作方法

點擊次數:143 發布時間:2021-11-05
  胎牛血清透析生產工藝優勢:
  該透析采用的是切向流過濾。切向流是指液體流動方向與過濾方向呈垂直方向的過濾形式。該方式使液體流動在濾膜表面產生剪切力,減小了濾膜上的物質堆積,保證了穩定的過濾速度。
  胎牛血清在無菌條件下要經過0.1微米膜三重過濾,要進行一系列的檢測,包括理化性質檢查,成分檢查、外源因子檢查以及促進細胞增殖的檢查等。
  由于不可能監測全部小分子,因此常選用葡萄糖為代表。血清中葡萄糖<5 mg/dL,即可以停止透析了。透析過程中,除監測葡萄糖濃度外(可采用葡萄糖氧化酶方法測定),還需仔細監測pH值和滲透壓。

  胎牛血清透析操作方法:
  1、固定:培養細胞的制片或冰凍切片用4%多聚甲醛固定30min(4℃)后,用80%酒精再固定2h(-20℃)。常規4%中性福爾馬林固定、石蠟包埋之切片進行脫蠟、水化。
  2、洗滌:玻片浸入PBS緩沖液,搖床上洗滌5min,三次。
  3、反應:洗滌后的玻片用吸水紙吸干細胞或組織周圍水分,按50μl/cm2滴加反應液,使反應液均勻地覆蓋于所有細胞或組織切片上,蓋上塑料蓋玻片,置濕盒中,37℃孵育1h。
  4、終止反應:去掉塑料蓋玻片,將玻片置盛有洗滌緩沖液的染色缸內,洗滌兩次,每次5min。
  5、FITC標記:洗滌后的玻片用吸水紙吸去細胞或組織周圍水分,按50μl/cm2滴加FITC反應液,室溫下避光孵育10min。
  6、洗滌:將玻片置于洗滌緩沖液內,洗兩次,每次5min。
  7、PI復染:將玻片置于盛有PI染液的染色缸內,室溫下避光染色30min。
  8、封片:用蓋玻片直接蓋在含PI染液的玻片上,亦可用無色指甲油涂于蓋玻片四周邊緣,置暗盒中,盡早鏡檢觀察。
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